EMI.（IF=8.4）｜哈兽研步志高所长团队验证表达猪瘟病毒E2糖蛋白的减毒非洲猪瘟病毒保护猪抵抗两种病毒的攻击

来源：生命科学前沿

近期，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所步志高团队在学术期刊《Emerging Microbes & Infections》（IF=8.4）上发表的一篇题为“An attenuated African swine fever virus expressing the E2 glycoprotein of classical swine fever virus protects pigs against challenge of both viruses”的研究性论文，该研究成功构建了一种基于七基因缺失的非洲猪瘟病毒（ASFV）减毒疫苗株HLJ/18-7GD的重组病毒HLJ/18-7GD-E2，单次接种重组病毒可同时激发有效免疫应答，对ASFV和CSFV的致死性攻击均提供完全保护，证实这种表达CSFV E2蛋白的ASFV重组减毒活疫苗具备作为二价疫苗的潜力，为防控非洲猪瘟和经典猪瘟的双重感染提供了有效解决方案。

文章链接：https://doi.org/10.1080/22221751.2025.2469636.

本研究在已开发的七基因缺失非洲猪瘟病毒（ASFV）减毒疫苗株HLJ/18-7GD基础上，通过同源重组技术将经典猪瘟病毒（CSFV）E2基因替换ASFV基因组中的EGFP基因（位点66,695–67,421），成功构建了重组病毒HLJ/18-7GD-E2，并经过PCR、Western blot、IFA等实验证明重组病毒HLJ/18-7GD-E2成功构建并具备同时诱导ASFV和CSFV免疫保护的潜力。

为评估外源基因（CSFV E2）在重组病毒中的稳定性，研究对HLJ/18-7GD-E2在猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中连续传代15次后进行分析。PCR检测（图2a）和测序验证（图S1）显示，传代后E2基因无碱基插入或缺失；Western blot（图2b）进一步证实不同传代次数的病毒均能正确表达E2蛋白，表明该基因在基因组中高度稳定。随后，通过多步生长曲线和TCID50测定评估外源E2基因对病毒复制能力的影响。结果显示，重组病毒HLJ/18-7GD-E2在PAMs中的复制动力学（图2c）及病毒颗粒活性（图2d）均与亲本株HLJ/18-7GD无显著差异，表明E2基因的插入未改变ASFV的复制能力。以上数据证明，重组病毒HLJ/18-7GD-E2在保持ASFV原有复制特性的同时，能够稳定表达CSFV E2蛋白。

为验证插入E2基因是否影响病毒毒力，研究通过动物实验评估了重组病毒HLJ/18-7GD-E2的安全性。实验方案如图3(a)所示，所有接种10⁶ TCID₅₀剂量HLJ/18-7GD-E2的猪在28天观察期内均未出现不良反应，体温保持正常（图3(b)、表S1），且全部存活（图3(c)）。结果表明，外源E2基因的插入未改变ASFV减毒株的低毒力特性，重组病毒HLJ/18-7GD-E2在猪体内安全性良好。

为验证HLJ/18-7GD-E2能否激发针对非洲猪瘟病毒（ASFV）和经典猪瘟病毒（CSFV）的特异性免疫应答，研究对接种该重组病毒的10周龄猪进行血清学分析。ELISA检测显示，免疫猪在接种后14天（dpv）即产生抗ASFV抗体（图4a、表S2），并于25 dpv时出现高水平的ASFV特异性细胞免疫应答（图4b）。同时，针对CSFV E2蛋白的抗体检测表明，10头免疫猪中5头在14 dpv时已产生抗E2抗体，至21 dpv时所有免疫猪均表现出高水平的抗E2抗体（图4c）。结果表明，HLJ/18-7GD-E2可同步诱导针对ASFV和CSFV的体液与细胞免疫应答。

本研究通过高毒力ASFV HLJ/18毒株对免疫重组疫苗HLJ/18-7GD-E2的猪进行致死性攻毒，评估其保护效力。结果显示，免疫组（5头）中仅2头出现短暂发热（4-10天），所有猪在28天观察期内均存活，且组织内病毒载量极低，病理学分析未见明显病变（图5a-c）。相比之下，未免疫对照组（4头）在攻毒后5天起持续高热（峰值41.5°C），伴随典型临床症状，11天内全部死亡，全身组织及淋巴结中病毒DNA广泛分布，病理学显示肺充血、脾淋巴细胞耗竭、肾炎症浸润及淋巴结坏死等严重损伤（图5d-f）。结论表明，插入CSFV E2基因的HLJ/18-7GD-E2疫苗完全保留了亲本株对同源ASFV强毒株的免疫保护能力，且未引发显著病理异常，验证了其作为安全有效的ASFV/CSFV双价疫苗的可行性。

开发重组病毒作为二价疫苗候选株，对同步防控非洲猪瘟病毒（ASFV）和经典猪瘟病毒（CSFV）感染至关重要。这两种病毒引发的高致病性感染对养猪业造成巨大经济和社会损失。尽管仍需进一步研究以优化疫苗免疫接种方案，但本研究表明，基于ASFV的重组疫苗具有广阔前景，能够有效预防这两种致死性猪病毒感染，为双价疫苗的研发提供了重要科学依据。

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